微生物学检查
可采集水疱液、脑脊液、唾液、阴道拭子等标本接种于人胚肾、人羊膜或兔肾等易感细胞，经过2～3天培养后，观察细胞病变。HSV分离株的鉴定和分型通常采用免疫组化染色法。用原位核酸杂交或PCR法检测标本中的HSV DNA，敏感性和特异性均高 。
核酸扩增实验
单纯疱疹病毒的核酸扩增实验法（NAATs），已成为确认疱疹感染的高灵敏度方法，临床标本包括生殖器溃疡、黏膜表皮部位及脑脊髓液等标本。PCR方法对无症状HSV病毒播散的检测特别有用。HSV NAATs扩增检测最大的限制是检验的费用。此类特别的样本要用涤纶（Dacron）擦拭棒收取并置于病毒传送培养液中：NAATs标本在4”C时可保存72h，若需长期保存标本应保持在-20”C。此NAATs比病毒培养法检测单纯疱疹病毒的灵敏度高四倍。
血清抗体测定
HSV血清测试在下列情形可能有价值：
①HSV病毒培养阴性而有再发的生殖器官症状或非典型的疱疹症状；
②临床诊断生殖器疱疹，而无实验诊断证据；
③标本采集不足或运送不理想；
④调查无症状患者（即生殖器疱疹患者的性伴侣）。
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